细胞的核数并不总是一个，某些类型的细胞具有多个细胞核。例如，破骨细胞是一种高度分化的多核细胞，具备独特的功能，但并不具备克隆能力，因此无法进行传代培养，而且其体外培养也相对困难。

骨代谢背景知识

在深入了解骨代谢之前，我们先来认识一些专业术语。

骨重塑

骨重塑是指破骨细胞清除老旧或受损的骨质，并由成骨细胞形成的新骨替代的过程。这个过程受到破骨细胞和成骨细胞之间“交流”的调控。

破骨细胞（Osteoclasts，OCs）

破骨细胞是来源于造血干细胞的骨吸收细胞，其通过分泌酸性酶和蛋白水解酶来降解骨质。

成骨细胞（Osteoblasts，OBs）

成骨细胞是骨形成细胞，来源于间充质前体细胞，经过转录因子的作用分化为骨祖细胞谱系，最终成熟为骨细胞。

骨矿化

骨矿化是指钙和磷等无机盐沉淀到骨组织中的过程。作为特殊的结缔组织，骨骼具有高度矿化的结构和构造，能够为身体提供支撑，同时保护内脏器官并为血液造血组织提供场所。此外，骨骼是无机离子的主要来源和储存地，对维持体内矿物质稳态和能量代谢具有重要作用。

骨吸收

骨吸收是指骨钙释放的过程，破骨细胞通过分解硬骨组织释放钙离子到血液中。破骨细胞是唯一能被明确降解骨的细胞，其在骨稳态和健康维护中至关重要。其分化过程经历多个阶段，包括破骨细胞前体、多核破骨细胞及成熟破骨细胞等阶段。

破骨细胞的体外诱导

以下是使用RAW264.7细胞诱导破骨细胞的实验方案：

1. 将RAW2647细胞用含10% FBS的α-MEM培养基制成细胞悬液，随后以3×10⁴细胞/孔的密度接种于24孔板中。
2. 细胞接种12小时后，加入RANKL（20-100 ng/mL）。每3天更换培养基并补加RANKL。
3. 在分化培养4天后会出现明显的多核破骨细胞，并在第5天至第6天达到高峰。

值得注意的是，RAW2647细胞会表达M-CSF及其受体c-fms，因此仅需添加RANKL即可诱导破骨细胞分化，无需额外添加M-CSF。

破骨细胞的鉴定

形态学鉴定

1. 多核巨细胞可在相差显微镜下观察到≥3个细胞核（成熟破骨细胞通常含有10-20个核）。

2. 伪足结构，活化破骨细胞的边缘呈现出“皱褶缘”。

功能标志物检测

1. TRAP染色：破骨细胞特有的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）可作为鉴定破骨细胞的重要标志物。

2. 骨吸收实验：观察骨髓单核细胞（BMMs）的骨吸收功能，通过超声波去除表面细胞后应用扫描电子显微镜（SEM）对吸收凹陷进行成像，使用ImageJ软件量化凹陷面积。

分子标志物检测

通过qPCR和Western blot检测Trap、NFATc1、CTSK（组织蛋白酶K）和DC-STAMP等分子标志物，以确保破骨细胞的分化准确性。

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