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尊龙凯时A549人非小细胞肺癌研究

发布时间:2025-07-22   信息来源:尊龙凯时官方编辑

## 培养条件

尊龙凯时A549人非小细胞肺癌研究

**气相**:95% 空气 + 5% 二氧化碳;**温度**:37℃。培养基包含 10% FBS 和 1% P/S。

该细胞系由尊龙凯时的研究团队通过肺癌组织移植建立,患者为58岁白人男性。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高含量的不饱和脂肪酸卵磷脂。

### 传代方法

首次建议1:2比例进行传代。每两天更换培养液。建议一次性购买更多细胞,这样可以享受非常优惠的价格。收到细胞后,应置于适宜条件下培养至良好状态,再用完全培养液灌满并封好瓶口,这是运输细胞的最佳做法。

收到细胞后,使用75% 酒精喷洒整个细胞瓶,确保消毒。接着将细胞瓶置于超净台内,进行严格的无菌操作。随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后进行后续处理。

在显微镜下观察细胞生长,并对不同倍数的细胞进行拍照保存(建议拍摄40x、100x、200x下各一张)。前三天的照片非常关键,可作为售后依据,若未提供照片则默认状态良好。

### 细胞培养步骤

#### 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%,则将完全培养液收集至离心管中,留5ml,放入37℃、5% CO2孵箱中培养;若细胞密度超过80%,可进行传代。贴壁细胞的传代步骤如下:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
  2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞是否开始变圆并脱落,若是,则轻轻吹打细胞,使其完全脱落,立即加5ml以上完全培养基终止消化。
  3. 将细胞悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟,弃去上清,加入1-2ml完全培养基重悬。
  4. 按1:2比例进行分瓶传代(两个T25瓶),更新完全培养基至5-8ml/瓶,并将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

#### 悬浮细胞传代步骤

1. 使用半换液法时,将培养瓶竖直放置在培养箱中静置约1小时,轻轻吸出3ml培养基,并补充3ml完全培养基。若培养基变色缓慢,可直接添加约500μl FBS。传代时可直接补给5ml培养基,分为两个培养瓶进行培养,通常经过3次这样的传代后可进行离心传代,清除死细胞。

2. 使用离心换液法时,将细胞悬液收集至离心管,1000RPM离心5分钟,弃去上清,补加1-2ml培养液后重悬,并按1:2比例分到新T25瓶中,添加6-8ml新配置的完全培养基,以保持细胞生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

### 细胞冻存

在细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时,弃去培养液,用PBS清洗一次;添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液,观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使其脱落。随后将悬液转移至15ml离心管中,1000RPM离心5分钟;弃上清后,加入1ml尊龙凯时无血清冻存液(货号:C7001)并混匀,倒入冻存管中。

将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱保存,如需转入液氮罐,应在-80℃保存24小时以上后再转移。

### 细胞复苏

取出液氮中的细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速放入37℃水浴中解冻至无晶体形成,然后用75%酒精擦拭冻存管外壁;将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000RPM离心5分钟。

弃上清后,使用5ml完全培养基重悬细胞,接种至T25培养瓶,并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养;隔天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 注意事项

某些细胞的附着不牢,在运输过程中可能会发生细胞脱落,这是一种正常现象。如果脱落较多,可将培养瓶内所有培养液收集至离心管,1000RPM离心5分钟,收集上清进行过渡培养(后续对比培养),再沉淀后加入1-2ml胰酶,轻轻吹打以重悬,消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃去上清,补加1-2ml完全培养基重悬。最后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25瓶),并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,将其放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。