尊龙凯时的膜蛋白在制备过程中就像一位“毒王”，稍不注意就可能导致宿主菌失活。与其在BL21上死磕，不如尝试使用C41(DE3)菌株。其自带的lacUV5启动子具有“减速buff”，让表达过程变慢，使细胞保持活性，从而提高膜蛋白的产量！

在培养基的选择上，建议不再使用富含营养的TB，而是换用“穷酸”的M9培养基。这样的细胞如同吃糠咽粮，反而能够更好地折叠蛋白，实验证明其产量不仅不会下降，还会有所提升！如果你遇到“隐形条带”问题，不妨考虑尝试跨物种的同源蛋白，换一条序列可能就会迎来柳暗花明的局面；若仍然无济于事，可以给它加上一个GFP小尾巴，通过活体追踪确保全程不掉线！

膜蛋白在“卸妆”后最怕失活，虽然去污剂具有诱惑力，但容易使蛋白结构变形。因此，我们推荐新手使用DDM或LMNG。这些去污剂如同棉花糖般轻柔包裹着蛋白质，能够有效保持其功能，晶体学友好！如果追求“原汁原味”，可以利用纳米圆盘将脂质与蛋白质一同打包，既能保持天然构象，又能确保功能检测优秀！

在“泡澡”的温度上也不可大意：4°C过夜过于佛系，而20-30°C轻摇2小时可以显著提高萃取效率，确保蛋白的快乐，而你也能省心不少！在使用镍柱进行纯化时，要注意要“松”。用松散的填料或蠕动泵进行样品循环，能够有效避免His标签被埋在膜里而失效。

如果蛋白显得“高冷”不愿上柱，试试将6×His标签增加到12×His，或者在标签和蛋白之间添加几个柔性的氨基酸“小枕头”，立即让蛋白主动与柱子结合！钴柱也是一个隐藏的利器，虽然回收率稍低，但纯度却能大幅提升，所得到的条带干净得令人感动！

最后一步使用SEC时也不可偷懒，尽管峰型可能看起来“妖娆”，用动态光散射DLS进行检测，可以一目了然地判断多聚体还是单体。这套“保命三连”让膜蛋白无论多么傲娇，都无法逃避！从表达到纯化，每个步骤都给蛋白舒适的“SPA”，最终获得高纯度、高活性的样品，让你在胶跑、结晶与功能实验上都能顺利进行！