一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM（含NaHCO3 15g/L） + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：建议第一次1:2传代

传代情况：2天换液

备注：用无菌离心管收集瓶内培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

为确保细胞活性，收到细胞后应立即培养至良好状态，然后灌满完全培养液，封好瓶口。此方法是运输细胞的最佳策略。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后在超净台内确保无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数拍照保存，前三天的照片是重要的售后依据。如果未提供照片，则默认收到状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，请将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，即可进行传代培养，具体步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。观察细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速将其取回操作台，轻轻敲击培养瓶，随后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
轻轻摇打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，添加1-2ml完全培养基重悬。
按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml于培养瓶中，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻摇打细胞使其脱落。将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟。
弃去上清，按照比例加入1ml尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管，快速置于37℃水浴中解冻，直到无冰晶出现，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养；
第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些细胞可能粘附不牢，易发生脱落，这属于正常现象。如脱落较多，建议将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，进行1000RPM离心5分钟，收集的上清可用作过渡培养。在处理沉淀时，加入胰酶1-2ml，轻轻摇打、重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再进行离心。

随后，应按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并添加新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）可以重发的情况

如细胞在运输过程中出现任何问题，包括丢失、瓶身破损、培养液漏液，均可申请重发。
细胞污染问题需在收到产品48小时内提出真实实验结果，经核实后可重发。
常温发货的细胞在静置24小时后，干冰运输的细胞解冻后24小时内若大多数细胞未存活（需提供清晰真实的细胞状态照片），可申请重发。
若干冰运输的细胞在复苏后24小时或常温运输的细胞在静置4小时后出现污染，可申请重发。
如细胞活性不足，请在收到产品7天内提出真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，经核实后可重发。
收到细胞当天及第2、3天请及时拍照，若3天未告知，视为产品合格。在4-7天内如出现问题，需提供前3天照片以及操作记录，并与技术人员沟通，由技术人员判定责任后可进行重发。

2）不予重发的情况

若因客户自身原因导致的细胞污染，不予重发。
如因客户错误操作导致细胞状态不佳，不予重发。
使用非强烈推荐的培养体系导致细胞状态不良，不予重发。
细胞状态不良且未提供前3天的照片，不予重发。
在培养过程中经其他处理导致的状态问题，不予重发。
若收到细胞后2天内未告知问题情况，不予重发。
视具体情况而定。