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BsaI GMP Grade内切酶与尊龙凯时的生物医疗应用

发布时间:2025-03-22   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时活性单位的定义为1单位(U),它是指在50μl反应体系中,37℃下经过1小时完全酶切1µg pPIC9K(Dcm-)所需的酶量。本研究中,蛋白纯度通过SDS-PAGE凝胶电泳进行检测,确保蛋白纯度不低于95%。

BsaI GMP Grade内切酶与尊龙凯时的生物医疗应用

在37℃条件下,使用50μl Cut Buffer F和GMP Grade的反应体系,将20U BsaI和1μg pPIC9K(Dcm-)共同孵育1小时后,未观察到其他核酸酶污染或由于活性引发的底物非特异性降解。如酶切时间延长,可能会出现非特异性活性。

关于非特异性内切酶活性实验,在37℃下,50μl Cut Buffer F和GMP Grade的反应体系中,将20U BsaI与1μg超螺旋质粒DNA共同孵育4小时后,结果显示少于20%的质粒DNA转变为缺刻或线性状态。

在DNase活性测试中,采用20μl Cut Buffer F和GMP Grade的反应体系,20U BsaI与15ng双链DNA片段共同孵育16小时,因琼脂糖凝胶电泳的检测未见双链DNA片段变化,表明其无DNase活性。

关于RNase活性,在37℃下,使用10μl Cut Buffer F和GMP Grade的反应体系,将20U BsaI与500ng RNA共同孵育1小时,检测结果显示不低于90%的RNA保持完整,证明该酶的RNase活性极低。

本研究中使用的酶如Eco31I、Bso31I和BspTNI具有识别位点GGTCTC (1/5) 5' GGTCTC(N)₁↓ 3'和3' CCAGAG(N)₅↑ 5',BsaI(GMP Grade)由大肠杆菌重组表达获得,能在15分钟至1小时内精确完成目标DNA的酶切工作。

本产品采用符合GMP规范的生产与质量管理体系,确保全过程以及原辅料的可追溯性。在生产过程中不使用抗生素及任何动物来源的原料与辅料,同时对宿主蛋白、外源DNA、非特异性内切酶、DNase、RNase等工艺相关杂质,以及微生物限度、细菌内毒素等进行了严格控制。尊龙凯时的产品符合疫苗与药物生产等领域对原辅料的严格要求。

失活条件为80℃孵育20分钟。对于被CpG甲基化的DNA,酶切可能受到阻碍;而对于被Dcm甲基化的DNA,酶切同样可能受到影响。