尊龙凯时提供的人B细胞淋巴瘤OCILy19细胞培养说明书如下：

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基+10% FBS+1% P/S
传代方法：首次建议以1:2比例进行传代。

备注：使用无菌离心管收集并保存培养基，以便进行过渡对比培养。若对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培养

细胞收到后，待其恢复至良好状态后，填满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行相关操作。显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议拍摄40x, 100x和200x倍各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后将瓶盖略微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2孵箱中。如果细胞密度超过80%，可按照以下步骤进行细胞传代：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入大于5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补充1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，使用PBS清洗一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时以上再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），快速置入37℃水浴解冻，直至冻存管中无晶体，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，更换新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因黏附性差而脱落，这是正常现象。若脱落较多，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养。沉淀细胞后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代。

五、售后条款

如细胞出现问题，可重发的情况包括：1）运输途中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等；2）细胞污染问题需在48小时内提供真实实验结果；3）常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货细胞复苏后24小时内大多数细胞未存活等情况，需提供真实的细胞状态照片；4）若出现污染问题，并提供相关附件，符合判定标准的可进行重发。
不予重发的情况包括：1）客户造成的污染；2）客户不正确操作导致细胞状态不佳等。具体情况将在判断后处理，欢迎与尊龙凯时的技术团队沟通。