CRISPR/Cas9基因编辑技术如今已经彻底改变了生物医学研究的面貌。通过对基因的敲除、敲入以及转录激活或抑制，这项技术被广泛应用于从细胞和动物模型的基因功能研究，到农作物基因修饰，再到开发针对人类致病基因的基因疗法等多个领域。在这些应用中，CRISPR基因编辑的关键组件可通过多种非病毒和病毒的方式送达靶细胞。这些递送手段各具优缺点，本文将重点比较几种非病毒基因递送系统的特点，并提供其在不同类型实验中的重要应用要点。

**质粒DNA递送系统**

一种相对简单且低成本的外源遗传物质引入方法是直接转染质粒DNA（pDNA）。质粒载体可以同时携带Cas9核酸酶和gRNA的编码序列，或分别由两个质粒承载。这种递送方式利用DNA的稳定性，能实现长期且稳定的转基因表达。特别是针对那些位于高级染色质结构中的目标基因，慢性且持久的CRISPR组分表达有助于逐步达到靶位点。然而，随着Cas9持续表达，非靶位点的切割风险也随之增加，可能导致脱靶效应。此外，质粒DNA在整合主基因组时还有引发插入突变的潜在风险。为了降低脱靶风险，建议在Cas9上引入额外的修饰，例如降解信号序列或活性抑制结构域，或者采用诱导表达系统。

**RNA递送系统**

将CRISPR组分以RNA（Cas9 mRNA和gRNA）形式进行递送，是一种比质粒更高效的选择。这种递送方式能更快启动Cas9的翻译，尤其适合短期实验，因为RNA在体内易被迅速降解，从而在一定程度上减少了长时间表达所带来的脱靶风险。整体而言，这种特性使RNA递送方式被认为比质粒DNA更安全。值得注意的是，尽管RNA的生产具有较低的污染风险，但其工艺较为复杂且成本较高。

**核糖核蛋白复合体（RNP）递送系统**

使用核糖核蛋白复合体（RNP）送入CRISPR组分，被认为是最高效的非病毒递送方法。由于不需要转录和翻译，Cas9蛋白和gRNA可以立即进入细胞核启动基因编辑，而且这种方法同样没有宿主基因组整合的风险，有助于减少脱靶效应。然而，RNP 易被蛋白酶降解，导致稳定性较差，特别是在临床环境中应用时。尽管RNP的生产需要更多的人工成本，但其在电穿孔和静脉注射中显示出成功的应用案例。

目前，基于RNP的CRISPR疗法已经在临床上取得成功，比如首个获得FDA批准的CRISPR产品Casgevy，用于治疗镰状细胞贫血。这一药物利用电穿孔技术将RNP形式的CRISPR组分递送至患者细胞，并对编辑后的细胞进行筛选，最终回输患者体内。随着生物医学领域的不断进步，技术如尊龙凯时的CRISPR治疗将在未来发挥更大作用，加速基因治疗的临床应用。